產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST
1 儀器和試藥
液相色譜;TCQ-250超聲波清洗儀(北京醫(yī)療設(shè)備二廠);電子天平AEG-220紫外分光光度儀UV-265甲醇為優(yōu)級(jí)純;乙腈為色譜純;其他試劑均為分析純;苦參堿對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供(批號(hào):110805-200306)。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相乙腈-甲醇-磷酸鹽溶液(25∶10∶65);檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm;流速1 ml/min;柱溫25 ℃。
2.2 供試品溶液的制備
取本品50 ml,搖勻,精密量取5 ml,加濃氨試液調(diào)pH=10后,用氯仿(30、30、30、20、20 ml)提取5次,合并提取液,揮干氯仿,加甲醇適量溶解殘?jiān)?,濾過(guò),濾渣、容器用甲醇洗滌3次,每次5 ml,合并洗液與濾液,定量轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。
2.3 對(duì)照品溶液的制備
取經(jīng)P2O5減壓干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量,精密稱定,加流動(dòng)相制成每毫升約含0.530 mg的對(duì)照品溶液。
2.4 陰性對(duì)照品溶液的制備
取缺苦參總生物堿的樣品適量,依供試品溶液的制備法,制備陰性對(duì)照品溶液。
2.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
分別取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖。結(jié)果表明供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,有相同保留時(shí)間的色譜峰,陰性對(duì)照無(wú)干擾。理論塔板數(shù)為8 128。
2.6 線性關(guān)系考察
精密稱取苦參堿對(duì)照品適量,依對(duì)照品溶液制備法制備濃度0.106、0.318、0.530、0.742、0.954 g/L的溶液,分別精密吸取上述溶液5 μl,按上述色譜條件測(cè)定峰面積,以峰面積積分值為縱坐標(biāo),對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為:Y=38788X-53(r=0.999 8),表明苦參堿在0.53~4.77 μg呈線性關(guān)系。
2.7 精密度試驗(yàn)
精密吸取上述苦參堿對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定苦參堿峰面積,RSD為1.58%,表明精密度良好。
2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密量取本品適量,依供試品溶液制備法制備供試品溶液,再精密吸取供試品溶液10 μl,依上述色譜條件在0、2、4、6、8 h分別進(jìn)行測(cè)定,記錄峰面積,RSD為1.49%,表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.9 重復(fù)性試驗(yàn)
分別精密量取同一樣品5份,依供試品溶液制備法制備5份供試品溶液,精密吸取供試品溶液各10 μl,依上述色譜條件測(cè)定,RSD為0.95%,表明該方法的重復(fù)性良好。
2.10 加樣回收率試驗(yàn)
精密量取0.5 ml已知含量(35.767 g/L)的婦得康洗劑5份,分別添加苦參堿對(duì)照品適量,按上述供試品溶液制備法制備加樣回收供試品溶液,并進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算回收率,見(jiàn)表1。結(jié)果苦參堿的平均回收率為98.6%,RSD為1.17%。
2.11 樣品測(cè)定
精密量取樣品適量,依供試品溶液制備法制備供試品溶液,分別精密吸取對(duì)照品溶液5 μl與供試品溶液10 μl注入液相色譜儀,依上述色譜條件測(cè)定,記錄苦參堿峰面積,重復(fù)測(cè)定2次,取平均值。結(jié)果見(jiàn)表2。表1 苦參堿的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果2 10批樣品中苦參堿的含量
3 討論
3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
精密稱取干燥至恒重的苦參堿對(duì)照品適量,用流動(dòng)相溶解配成標(biāo)準(zhǔn)溶液,對(duì)苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,結(jié)果表明標(biāo)準(zhǔn)溶液在200 nm處有zui大吸收,考慮紫外吸收末端干擾大,且樣品中苦參堿含量高,故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm。
3.2 流動(dòng)相的選擇
選擇了3種流動(dòng)相:(1)乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液(1∶9),氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.0;(2)乙腈-0.005 mol/L庚烷基磺酸鈉溶液(25∶75);(3)乙腈-甲醇-磷酸鹽溶液(25∶10∶65)。經(jīng)多次測(cè)試結(jié)果表明,流動(dòng)相(1) 峰分離不好,流動(dòng)相(2)的峰型不好,出現(xiàn)脫尾現(xiàn)象,流動(dòng)相(3)出峰時(shí)間合理,峰型好,分離度大于1.5。
3.3 萃取次數(shù)的考察
取洗劑5 ml,加濃氨試液調(diào)pH=10后,分別用氯仿(30、30、30、20、20、20 ml)提取3、4、5、6次,合并提取液,揮干氯仿,加甲醇適量溶解殘?jiān)瑸V過(guò),濾渣,容器用甲醇洗滌3次,每次5 ml,合并洗液與濾液,定量轉(zhuǎn)移至100 ml量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,通過(guò)比較峰面積,5次萃取基本可將苦參堿萃取*。